Pseudouridin-vermittelte Stoppcodon-Lesung in S. cerevisiae ist sequenzkontext-unabhängig

Zusammenfassung

Wir haben bereits gezeigt, dass das Ribosom das modifizierte Stoppcodon durchliest, wenn das Uridin eines Stoppcodons (UAA, UAG oder UGA) pseudouridyliert ist. Es ist jedoch nicht klar, ob das Pseudouridin (Ψ)-vermittelte Durchlesen vom Sequenzkontext der mRNA abhängt oder nicht. Hier verwenden wir mehrere verschiedene Ansätze und das Hefesystem, um diese Frage zu klären. Wir zeigen, dass wir, wenn ein Stoppcodon (premature termination codon, PTC) in die kodierende Region einer Reporter-mRNA an verschiedenen Positionen (mit unterschiedlichen Sequenzkontexten) eingeführt und pseudouridyliert wird, ein ähnliches Ausmaß an Durchlesen feststellen. Mithilfe von Mutations- und Selektions-/Screen-Analysen zeigen wir außerdem, dass die stromaufwärts gelegene Sequenz (relativ zum PTC) sowie die Nukleotide, die das PTC umgeben (stromaufwärts und stromabwärts), eine minimale Rolle (wenn überhaupt) bei der Ψ-vermittelten Ribosomen-Durchlässigkeit spielen. Interessanterweise konnten wir keine Unterdrückung von NMD (Nonsense-vermittelter mRNA-Zerfall) durch gezielte PTC-Pseudouridylierung im Hefesystem feststellen. Unsere Ergebnisse deuten darauf hin, dass die Ψ-vermittelte Nonsense-Suppression auf der Translationsebene stattfindet und dass die Suppression im Gegensatz zu einigen zuvor charakterisierten seltenen Stoppcodon-Durchleseereignissen sequenzkontextunabhängig ist.

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Hervorhebungen von mir.

So wie ich das verstehe, kann es passieren, dass bei der Verwendung von Pseudouridin für die Codon-Optimierung das Stoppcodon nicht gelesen / überlesen wird. Das bedeutet eine permanente Produktion des toxischen Spikes, bis/falls das Immunsystem die mit mRNA gekaperte Zelle(n) zerstört.

Oder ganz kurz zusammengefasst: Es ist sehr wahrscheinlich, dass nach mRNA-Spritzen das toxische Spike permanent produziert wird, da die Gefahr hoch ist, dass das Stoppcodon mißachtet wird.

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Grüße



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Niemals haben wir "unser" Leben im Griff!

Die meisten von uns ziemlich gut, ohne es zu wissen.